Análisis molecular de enfermedad de Gaucher
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Análisis molecular de enfermedad de Gaucher: 5 mutaciones más frecuentes
GENERALIDADES
La enfermedad de Gaucher es una entidad metabólica debido a la deficiencia de la enzima betaglucosidasa ácida lo cual trae como consecuencia acumulación de glucosilceramida, es la más común de las enfermedades por depósito de lípidos. Clínicamente tiene una presentación muy variable al observarse formas perinatales letales, pacientes con lesiones óseas características, hepatoesplenomegalia, anemia, trombocitopenia y complicaciones cardiopulmonares hasta individuos asintomáticos. La forma de herencia es autosómica recesiva y la causa son mutaciones en el gen GBA. El análisis de 5 mutaciones patogénicas: N370S (c.1226A>G/p.Asn409Ser), L444P (c.1448T>C/p.Leu483Pro), IVS2+1G>A (c.27+1G>A), 84GG (c.93_94insG/p.Gln32Alafs*15), 55 bp del ex9 (c.1263_1317del55/p.Leu422Profs*4) por PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y posterior técnica de secuenciación Sanger permite identificar la mutación responsable en el 90% los casos de población judía Ashkenazi y en el 50-60% en otras poblaciones.
INDICACIONES
1.- Pacientes con características clínicas de la enfermedad: tipo 1: lesiones óseas características (osteopenia, lesiones líticas, fracturas, osteonecrosis), hepatoesplenomegalia, anemia y trombocitopenia. Tipos 2 y 3: retraso global del neurodesarrollo, hepatoesplenomegalia y alteraciones neurológicas (crisis convulsivas, ataxia, oftalmoplejía supranuclear).
2.- Identificación de portadores en padres y otros familiares de primer grado, como hermanos de pacientes, en quienes se haya identificado la mutación responsable en el gen GBA.
3.- Diagnóstico prenatal en familias en quienes la mutación responsable ha sido identificada.
MUESTRA REQUERIDA
Enviar cualquiera de las siguientes opciones de acuerdo a la indicación del estudio:
1.- En pacientes con sospecha o diagnóstico de enfermedad de enfermedad de Gaucher:
a) 3-5 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (NO CONGELAR), incluso por 5 a 7 días previo a su procesamiento.
b) Muestra de raspado de mucosa: con 2 a 3 cepillos estériles de citología o con un cepillo dental nuevo realizar de 20 a 30 raspados en carrillos y lengua, dejar secar a temperatura ambiente y enviar secos. La muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
c) Sangre seca colocada en papel filtro (enviar 5 círculos cubriéndolos en su totalidad), enviar a temperatura ambiente.
2.- Para diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la mutación responsable en el gen GBA: Líquido amniótico (5ml), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 3 días previo a su procesamiento.
TIEMPO DE ENTREGA
2-3 semanas (diagnóstico prenatal en 5 a 7 días).
Electroferograma parcial del exón 10 (cadena “forward” o sentido) del gen GBA. La alineación de la secuencia obtenida con las secuencias genómica de referencia (NG_009783.1) y de la isoforma 1 del mRNA (NM_000157.3) del gen GBA revela un genotipo homocigoto para la VARIANTE PUNTUAL PATOGÉNICA DE SENTIDO ERRÓNEO c.1448T>C (p.Leu483Pro) o “L444P” (flecha), la cual condiciona un cambio del leucina (codon CTG) en la posición 483 (o 444 en la nomenclatura tradicional) por una prolina (codon CCG) de la enzima beta-glucosilceramidasa ácida. Con lo anterior, se confirma el diagnóstico de Enfermedad de Gaucher en el paciente por un genotipo GBA homocigoto para la variante “L444P”.
