Análisis molecular de síndrome de Morquio o Mucopolisacaridosis tipo IVA
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Análisis molecular de síndrome de Morquio o Mucopolisacaridosis tipo IVA
GENERALIDADES
El síndrome de Morquio o mucopolisacaridosis tipo IVA (MPS IVA) es una enfermedad multisistémica con diversos grados de afección causada por atesoramiento lisosomal secundario a deficiencia de la enzima N-acetilgalactosamina 6 sulfatasa la cual es codificada por el gen GALNS. La forma de herencia es autosómica recesiva por lo que puede afectar a hombres y mujeres. El análisis para la identificación de la mutación responsable de la enfermedad se realiza mediante la técnica de secuenciación Sanger la cual permite detectar deleciones, duplicaciones e inserciones pequeñas y sustituciones en el 84% de los pacientes. La confirmación del diagnóstico, mediante el estudio molecular al identificar las mutaciones responsables en un paciente, permite ofrecer un diagnóstico certero a la familia, la detección de portadores (individuos clínicamente sanos pero con riesgo de transmitir la enfermedad, en familiares de un paciente como padres o hermanos), así como ofrecer diagnóstico prenatal en futuras gestaciones.
INDICACIONES
1.- Pacientes con cuadro clínico sugestivo de MPS IVA: capacidad intelectual normal, rasgos faciales toscos, alteraciones oftalmológicas (opacidad corneal), macroglosia, voz ronca, infecciones respiratorias de repetición, otitis, hipoacusia, alteraciones óseas (disostosis múltiple, cifosis, contracturas en flexión, mano con dedos en flexión, síndrome del túnel carpiano, talla baja), hepatomegalia, esplenomegalia, hernia umbilical o inguinal, enfermedad pulmonar obstructiva o alteraciones cardiológicas (enfermedad valvular, falla cardiaca congestiva).
2.- Pacientes con cuadro clínico sugestivo y elevación de GAGs urinarios (queratán sulfato y condroitin 6 sulfato).
3.- Pacientes con cuadro clínico sugestivo y actividad enzimática de N-acetilgalactosamina 6 sulfatasa reducida.
4.- Identificación de portadores en familiares de primer grado (padres o hermanos) de pacientes, en quienes se haya identificado la mutación responsable en el gen GALNS.
5.- Diagnóstico prenatal en familias en quienes la mutación responsable ha sido identificada.
MUESTRA REQUERIDA
Enviar cualquiera de las siguientes opciones de acuerdo a la indicación del estudio
1.- En pacientes con cuadro clínico sugestivo de MPS IVA o en familiares (padres o hermanos) con mutación identificada previamente:
a) 3-5 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (NO CONGELAR), incluso por 5 a 7 días previo a su procesamiento.
b) Muestra de raspado de mucosa: con 2 a 3 cepillos estériles de citología o con un cepillo dental nuevo realizar de 20 a 30 raspados en carrillos y lengua, dejar secar a temperatura ambiente y enviar secos. La muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
c) Sangre seca colocada en papel filtro (enviar 5 círculos cubriéndolos en su totalidad), enviar a temperatura ambiente.
2.- Para diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la mutación responsable en el gen GALNS: Líquido amniótico (5ml), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 3 días previo a su procesamiento
TIEMPO DE ENTREGA
2-3 semanas (diagnóstico prenatal en 3-5 días).
Electroferograma parcial del exón 5 del gen GALNS (cadena F). El análisis del electroferograma con la secuencias genómica y del mRNA de referencia del gen GALNS revela un genotipo heterocigoto para una variante patogénica tipo microdeleción que elimina la citosina No. 454 del cDNA (c.454del), que a su vez condiciona un corrimiento del marco de lectura con la generación inmediata de un codón de paro prematuro en la posición 152 de la GALNS (p.Leu152*). La flecha indica el corrimiento del electroferograma a partir del sitio de la microdeleción c.454del.
Electroferograma parcial del intrón 8-exón 9 del gen GALNS (cadena F). El análisis del electroferograma con la secuencias genómica y del mRNA de referencia del gen GALNS revela un genotipo heterocigoto para una variante puntual patogénica que elimina el sitio aceptor de splicing del intrón 8 (c.899-2A>G, flecha). El efecto patogénico de este cambio previamente descrito en MPS IVA y en la GALNS mutation database (http://galns.mutdb.org/database), se describe como una no inclusión del exón 9 en el transcrito maduro con la generación de un corrimiento del marco de lectura (p.Gly300fs*29).
Los resultados anteriores indican un genotipo heterocigoto compuesto para dos variantes patogénicas y severas del gen GALNS indicativo del diagnóstico de MPS IVA.
