Análisis molecular de enfermedad de Pompe

GENERALIDADES

La enfermedad de Pompe afecta principalmente tejido muscular lo que condiciona complicaciones cardiacas y respiratorias, debido al acumulo lisosomal de glucógeno secundaria a la deficiencia de la enzima alfa-glucosidasa ácida codificada por el gen GAA. La forma de herencia es autosómica recesiva por lo que puede afectar a hombres y mujeres. El análisis para la identificación de la mutación responsable de la enfermedad se realiza mediante la técnica de secuenciación Sanger la cual permite detectar deleciones, duplicaciones e inserciones pequeñas y sustituciones en el 83-93% de los pacientes. La confirmación del diagnóstico, mediante el estudio molecular al identificar las mutaciones responsables en un paciente, permite ofrecer un diagnóstico certero a la familia, la detección de portadores (individuos clínicamente sanos pero con riesgo de transmitir la enfermedad, en familiares de un paciente como padres o hermanos), así como ofrecer diagnóstico prenatal en futuras gestaciones.

 

INDICACIONES

1.- Pacientes con características clínicas de la enfermedad: forma clásica infantil (hipotonía prenatal, debilidad muscular generalizada, cardiomiopatía hipertrofica con cardiomegalia, dificultad respiratoria), forma no clásica infantil y la forma de inicio tardío (debilidad muscular progresiva, falla respiratoria, hipoacusia).

2.- Pacientes con cuadro clínico sugestivo y actividad enzimática de alfa-glucosidasa ácida reducida.

3.- Identificación de portadores en familiares de primer grado, como padres y hermanos de pacientes, en quienes se haya identificado la mutación responsable en el gen GAA.

4.- Diagnóstico prenatal en familias en quienes la mutación responsable ha sido identificada.

MUESTRA REQUERIDA

Enviar cualquiera de las siguientes opciones de acuerdo a la indicación del estudio

1.- En pacientes con sospecha o diagnóstico de enfermedad de Pompe (hombres o mujeres) o en familiares en primer grado como padres o hermanos:

a) 3-5 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (NO CONGELAR), incluso por 5 a 7 días previo a su procesamiento.

b) Muestra de raspado de mucosa: con 2 a 3 cepillos estériles de citología o con un cepillo dental nuevo realizar de 20 a 30 raspados en carrillos y lengua, dejar secar a temperatura ambiente y enviar secos. La muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.

c) Sangre seca colocada en papel filtro (enviar 5 círculos cubriéndolos en su totalidad), enviar a temperatura ambiente.

2.- Para diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la mutación responsable en el gen GAA: Líquido amniótico (5ml), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 3 días previo a su procesamiento.

 

TIEMPO DE ENTREGA

2-3 semanas (diagnóstico prenatal en 5 a 7 días).

Ver Más

Pompe electro-secElectroferograma parcial (hebra “forward”) del exón 3 del gen GAA. La flecha indica el estado heterocigoto para la variante puntual patogénica de sentido erróneo c.655G>A (p.Gly219Arg, rs370950728), la cual cambia el sentido del codón 219 de glicina (GGG) por uno de arginina (AGG). Aledaños a la variante patogénica c.655G>A (p.Gly219Arg), se aprecia el estado heterocigoto para dos variantes benignas previamente descritas o polimorfismos tipo SNP (rs1800301 y rs1042395).

Electroferograma parcial (hebra “forward”) correspondiente únicamente al alelo GAA del exón 15 que porta una variante patogénica tipo indel que consiste en la deleción de la secuencia codificante del exón 15 en su extremo 3’ 5’-GTGGCCCGGCCCC-3’ y la inserción de una secuencia anormal 5’-TGCGACGTGG-3’ (c.2167_2179delinsTGCGACGTGG), que genera una deleción-inserción en marco de lectura (p.Val723_Leu727delinsCysAspValVal) a nivel del dominio altamente conservado de las glucosil-hidrolasas familia 31 (“Glyco_hydro_31; Glycosyl hydrolases family 31”) de la enzima GAA.

Lo anterior es indicativo de un genotipo GAA heterocigoto compuesto c.[655G>A];[2167_2179delinsTGCGACGTGG] o p.[Gly219Arg];[Val723_Leu727delinsCysAspValVal] confirmatorio de la Enfermedad de Pompe.