Distrofia muscular de Duchenne: identificación de portadoras
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Distrofia muscular de Duchenne: Análisis de dosis génica para identificación de portadoras con familiar varón afectado con mutación tipo deleción
GENERALIDADES
Las distrofias musculares de Duchenne y Becker son condicionadas por mutaciones en el gen DMD/B localizado en el brazo corto del cromosoma X. Hasta el 50-60% de los pacientes presentan como mutación responsable deleciones (pérdida) en el gen DMD/B. La identificación de este tipo de mutación confirma el diagnóstico en el paciente varón pero también permite la identificación de portadoras en familiares (mujeres generalmente sin manifestaciones clínicas pero que tienen riesgo de transmitir el padecimiento a su descendencia). El análisis certero para identificar mujeres portadores es mediante el análisis de dosis génica; lo que determina si la mutación en el varón afectado se originó como evento de novo (madre no portadora, observado en 1/3 parte de los casos) o se trata de un caso familiar (madre portadora de DMD/DMB). La identificación de mujer portadora permite ofrecerle asesoramiento genético con relación a riesgo de recurrencia en su descendencia así como la posibilidad de diagnóstico prenatal en futuras gestaciones. Para el análisis de dosis génica en este estudio se emplea la técnica de reacción en cadena de la polimerasa múltiple (PCR-M) y análisis densitométrico.
INDICACIONES
1.- Detección de portadoras en mujeres emparentadas con varones afectados (se requiere el análisis molecular que demuestre una mutación tipo deleción en un varón afectado previo a la identificación de portadoras).
MUESTRA REQUERIDA
En mujeres con sospecha de ser portadoras para DMD/DMB con un familiar varón afectado con mutación caracterizada tipo deleción:
a) 3-5 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (NO CONGELAR), incluso por 5 a 7 días previo a su procesamiento.
TIEMPO DE ENTREGA
2-3 semanas.
Electroforesis de los productos de PCR-M correspondientes a los exones 8 y 13 (exones control intramuestra, no deletados), 53 y 55 (exones problema, deletados en el paciente varón), carril PAC la mujer emparentada con el varón afectado y los controles femenino sano (carril FEM), masculino sano (carril MASC) y de mujer portadora de una deleción del exón 51 al 54 (carril PO). Se señalan los análisis densitométricos abajo de la figura de la imagen de electroforesis. La evaluación densitométrica para obtener el área bajo la curva de cada amplicón de los cuatro exones en la muestra de la PAC fue similar a la observada en los amplicones de los cuatro exones del control femenino sano (cociente amplicones PAC/FEM 1.1 +/-0.08) y doble respecto al control masculino sano (cociente PAC/MASC: 1.9 +/-0.05). En tanto, la evaluación densitométrica y el área bajo la curva del amplicón del exón 53 deletado en estado heterocigoto en el control PO, fue similar a lo observado en el control masculino sano (cociente amplicones PO/MASC 0.93 +/-0.08) y con una reducción al 50% respecto al control femenino sano y a la muestra de la PAC (cociente amplicones PO/FEM y PO/PAC 2.1 +/-0.1). Lo anterior, descarta el estado de portadora de la deleción de los exones 53 al 60 del gen DMD en la PAC. MPM: marcador de pesos moleculares, escalera de 100 pb.