GENERALIDADES
Dentro de los factores genéticos relacionados a la presencia de trombofilias destacan el alelo Leiden del gen del factor V y la mutación G20210A del gen de protrombina (factor II de la coagulación). Los individuos que presentan una copia (heterocigotos) para el alelo Leiden del factor V presentan 7 a 8 veces más riesgo de presentar trombosis venosa profunda, mientras que en los individuos homocigotos (dos copias con el alelo Leiden) el riesgo se incrementa a más de 70 veces. El riesgo relativo para el desarrollo de trombosis venosa profunda (y eventualmente tromboembolia pulmonar) asociada a embarazo o a ingesta de anticonceptivos orales en mujeres heterocigotas para el alelo Leiden es de 35 y en homocigotas de 100. La hipercoagulabilidad de los individuos portadores del alelo Leiden se atribuye a una resistencia a la acción anticoagulante de la proteína C activada.
Otras condiciones asociadas al alelo de Leiden, son enfermedad hipertensiva del embarazo, pérdidas gestacionales recurrentes de etiología no determinada, retraso del crecimiento intrauterino y desprendimiento prematuro de placenta.
Por otro lado, la mutación G20210A del gen de protrombina se ha asociado a una elevación de la concentración media de protrombina plasmática.
Los individuos heterocigotos para dicha mutación presentan de 3 a 7 veces más riesgo de desarrollar trombosis venosa profunda.
El análisis de los genotipos para el gen del factor V y II de la coagulación, se realiza mediante la técnica de mutagénesis dirigida por la reacción en cadena de la polimerasa o PCR tipo dúplex.
INDICACIONES
1.-Pacientes de ambos sexos con antecedentes de trombosis venosa (pulmonar, cerebral, mesentérica, etc.) con o sin factores de riesgo asociados.
2.-Pacientes femeninos con antecedentes personales o historia familiar de trombosis venosa o pulmonar asociada al uso de contraceptivos orales, terapia hormonal de reemplazo, embarazo y/o puerperio.
MUESTRA REQUERIDA
Se puede enviar cualquiera de las siguientes opciones:
a) 3-5 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (NO CONGELAR), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento.
b) muestra de raspado de mucosa: con 2 a 3 cepillos estériles de citología o con un cepillo dental nuevo realizar de 20 a 30 raspados en carrillos y lengua, dejar secar a temperatura ambiente y enviar secos. La muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
TIEMPO DE ENTREGA
2 a 3 semanas.
A) Electroforesis en gel de agarosa al 3% de los productos de PCR restringidos con la endonucleasa HindIII del exón 10 del gen del factor V (241 pb) y de la región 3’ no traducible del gen de protrombina o factor II (506 pb). Nótese el patrón de restricción compatible con la presencia de los genotipos de no riesgo en ambos genes en la muestra analizada de la paciente (carril PAC), al igual que el control homocigoto para los alelos silvestres en ambos loci (carril CTL): Alelo silvestre protrombina: 407 pb + 99 pb (flechas claras); alelo silvestre factor V: 241 pb (ausencia de sitio de restricción, flecha oscura). Carril S/R: Amplicones sin restringir. El control negativo [carril (-)] no muestra producto alguno. B) Electroforesis en gel de agarosa al 3% de los productos de PCR del gen MTHFR restringidos con la endonucleasa HinfI. Nótese que la paciente (carril PAC) muestra dos bandas de 198 y 178 pb, al igual que el control heterocigoto C/T para MTHFR (carril HETERO); carril (-): control blanco de la reacción. MPM: marcador de pesos moleculares, escalera de 100 pb. Los resultados anteriores, indican un estado homocigoto para ambas variantes de no riesgo en los loci codificantes de los factores V y II de la coagulación sanguínea y la presencia de un alelo para la variante termolábil de la enzima MTHFR en la paciente.